常用做法有以下几种:

1、以S-甲基异硫脲或S-甲基异硫脲硫酸盐为原料

用肌氨酸、肌氨酸钠或肌氨酸钾与S-甲基异硫脲或S-甲基异硫脲硫酸盐在水中或水与有机溶剂的混合物，于15℃~140℃。PH7~13条件下进行反应制备肌酸。产物经碱性络合剂提纯，平均收率为71.15%。

该方法的优点在于制备出的肌酸不含对人体有害的物质，而且反应在水中或在水与有机溶剂的混合物中进行，有利于温度的调节。而且，重结晶中加入的碱性络合物试剂有利于提高产品纯度，使肌酸的收率接近96%。

2、以O-甲基异脲盐为原料

用肌氨酸钠工业水溶液和O-甲基异脲甲基硫酸酯在15~20℃，PH 11条件下反应得到肌酸。

其特点是在肌氨酸钠水溶液中加入一水肌酸晶体作为晶种，使一水肌酸在反应混合物中的过饱和值低于自发形成晶核的值，避免了因为溶液中一水肌酸过饱和而引发晶核的自发形成，也避免了晶核自发形成时产物包含来自自发反应介质的杂质。该方法的优点是产品纯度高，缺点是收率不高。上海创赛提供肌氨酸钠，4316-73-8，含量33%-35% ，商品编号：D16-1015155-500g，价格1380元。

3、以尿素为原料

在有机溶剂和酸的条件下，用尿素和硫酸二甲酯反应得到O-甲基异脲硫酸甲酯，不用进一步纯化，产物在PH 11条件下和肌氨酸钠反应得到肌酸，收率为87%。上海创赛提供尿素，Urea，AR，57-13-6，商品编号：C16-U10045-500g，价格38元。

该方法的特点是使用的原料价格低廉，来源充足。且过程不会产生很多副产物，省去了纯化步骤，且收率很高，产物纯度适宜。