灭菌方法1。干热灭菌是借加热的高温空气进行灭菌的方法，即利用高于微生物的最高生长温度，来破坏蛋白质和核酸中的氢键，使蛋白质变性，酶失去活性，新陈代谢发生障碍，而导致细菌死亡。此法分为火焰灭菌法和热空气灭菌法两种。(1)火焰灭菌是一种利用火焰直接烧毁微生物最简单的干热灭菌方法。 特点是灭菌迅速、彻底，此法是将能耐高温的器物，直接在火焰上烧灼，使附着在物体表面的微生物死亡。使用火焰灭菌的同时，需结合酒精消毒，即将接种针、接种钩等需要彻底灭菌部分先用酒精擦洗后，放在酒精灯火焰上灼烧，较细小工具可烧红几秒钟，较粗大器具可灼烧时间长些，即可达到灭菌目的。 此法简便彻底，但应用范围有限，仅适用于能耐灼烧物件的灭菌，如接种工具、试管口、菌种瓶口等灭菌。(2)热空气灭菌法是利用加热的高温空气进行灭菌的方法，又称干热灭菌法、干烤灭菌法。干烤时热力传播和穿透主要靠空气对流或介质传导。对室内空间，可用火炉或火堆，使室温升至60°C以上保持12小时，可达到灭菌目的。 此法可同时排除潮湿空气，降低湿度，抑制杂菌孳生。少量物品干烤灭菌一般都在电热鼓风干燥箱内进行，将物品放在电热鼓风干燥箱中，通过加热使箱内空气温度上升而达到灭菌目的。具体操作方法：①将事先洗涤晾干或烘干的培养皿、移液管等器皿用纸包好，放人干燥箱内，注意不要塞得太满，要留空隙，使箱内空气流通和温度均匀；②关门后接通电源，转动温度调节旋钮，使温度逐渐上升至160°C〜170°C，恒温保持2小时，然后切断电源；③待温度降至70X：以下时，方可打开箱门，切勿在高温时开门，以免因氧气突然进人箱内而引起明火，或因突然降温导致玻璃器皿破裂。 本法只适用于制种中玻璃器皿及金属器械等灭菌，对培养基或其他含水分物质则不能使用。如果灭菌物品用纸包裹或带有棉塞时，必须严格控制温度不超过170°C，以免烤焦报纸和棉塞而引起火灾。此法优点是灭菌彻底，可保持器皿干燥。1。湿热灭菌湿热灭菌是利用蒸气的高温来破坏菌体蛋白质而达到彻底灭菌的方法，湿热灭菌也属于加热灭菌，是常用的一种灭菌法。 它不需要像干热灭菌那样的高温，在同一温度下，湿热杀菌力比干热杀菌力大。这是因为湿热灭菌时产生的热蒸气穿透力强，在湿热条件下，微生物吸收水分，蛋白质容易凝固变性。此外，当蒸气与被灭菌物质接触凝结成水时，又可释放出热量，加速温度提高，从而又能增强灭菌效果。 有些易变质物品，如食用菌培养基等必须采用这种方法进行灭菌。根据加温和处理方式不同，湿热灭菌分高压蒸气灭菌法、间歇灭菌法、常压蒸气灭菌法和热浴灭菌法4种：(1)高压蒸气灭菌法是将灭菌物置于密封容器内，利用加压髙温蒸气在较短时间内达到彻底灭菌的方法，又称加压蒸气灭菌法。 高压灭菌，是根据水的沸点可随压力增加而提高的原理，当水在密封紧闭的蒸锅中，其蒸气不能外溢，致使压力不断上升，从而使水的沸点不断提高，锅内温度随之增加。这样杀灭细菌和芽孢所需的时间会缩短，所以是一种有效的灭菌方法。它适用于培养基、生理盐水、玻璃器皿及用具等灭菌。 当压力在0。11兆帕（1。05千克/平方厘米）时，锅内温度可达121。3°C,保持20〜30分钟即可杀灭所有细菌和芽孢。高压灭菌设备常用的有手提式小型髙压灭菌器、立式高压灭菌器和卧式高压灭菌器3种类型。其中卧式髙压灭菌器中，容量较小的是直热式，即自带蒸气发生器，直接加热产生蒸气灭 菌，容量较大的压力容器蒸气多是外源性的，即自身无蒸气发生器，而是从外部通人蒸气，需要蒸气锅炉为其供气。 不同规格和型号的高压灭菌器使用方法不同，使用前要详细阅读使用说明书，并且定期检修，注意人身安全。(2)常压间歇灭菌法是湿热灭菌方法的一种，又称达尔灭菌法。在没有高压灭菌设备的条件下，对一些不宜用100C以上温度灭菌的物品，想要杀灭其中的细菌芽孢，可采用此法。 具体操作方法是将培养基或其他灭菌物威置在蒸锅内，经l〇〇°C流动蒸气灭菌30〜120分钟，杀死细菌的营养体，但不能杀死细菌的芽孢，然后将灭菌物取出，放置在28°C恒温培养箱中培养24小时，诱发其中残留的芽孢萌发成营养体（即菌丝体），然后再放人蒸锅内常压灭菌30分钟，以杀死新萌发的营养体。 如此反复连续常压灭菌3次，即可杀死灭菌物的全部芽孢。此法优点是不需加压，采用普通家庭厨房用的蒸笼即可进行灭菌；缺点是操作麻烦，耗时长。(3)常压蒸气灭菌法是将灭菌物品放在常压灭菌锅内，以自然压力的蒸气进行灭菌的方法，又称流通蒸气灭菌法。 由于灭菌锅的密封性能及所处的海拔高度不同，灭菌温度一般在95°C〜l〇5°C之间，灭菌时间以锅灶冒大气开始计算，保持8〜10小时以上。此法优点是：①容量大，一般一锅可装数百至上千瓶（袋②锅灶结构简单，可自行制造；③材料易得，成本低；④培养基养分不受长时间高温破坏，有助于培养料中的有机物分解。 因此，已被食用菌栽培户广泛用于制作原种、栽培种的培养基灭菌和熟料栽培的培养料灭菌。(1)热浴灭菌法是将物品放在加热的介质中，例如油类、甘油、液体石蜡或各种饱和盐类溶液中，采用高温进行灭菌，称为热浴灭菌法。热浴灭菌是在不具备专门的髙压蒸气灭菌设备或其他特殊情况下使用的一种简易方法。 它不能处理大型物品，并需专人守候火力来控制温度，只可用于少量物品的灭菌。此法在一般煮锅中即可进行，但必须有一支温度计用以测定介质温度。生产上常用灭菌方法有火焰灭菌、常压蒸气灭菌和高压蒸气灭菌3种